Metódy detekcie vírusov v infekčnom materiáli. Metódy zisťovania vírusov v infekčnom materiáli Nestretávajte sa s cudzími ľuďmi

Analýza podpisu

Táto metóda detekcie sa používa ako prvá. Vykonáva sa kontrolou obsahu analyzovaného objektu, či neobsahuje signatúry už známych hrozieb. Podpis je súvislá konečná postupnosť bajtov, ktorá je potrebná a postačujúca na jednoznačnú identifikáciu hrozby. V tomto prípade sa obsah skúmaného objektu porovnáva s podpismi nie priamo, ale pomocou ich kontrolných súčtov, čo umožňuje výrazne znížiť veľkosť záznamov vo vírusových databázach pri zachovaní jednoznačnej korešpondencie a následne aj správnosti detekciu hrozieb a liečbu infikovaných objektov. Vstupy vVírusové databázy Dr.Webnavrhnuté tak, aby vďaka rovnakému záznamu bolo možné odhaliť celé triedy alebo rodiny hrozieb.

Origins Tracing™

Ide o unikátnu technológiu Dr.Web , ktorý umožňuje identifikovať nové alebo upravené hrozby, ktoré využívajú infekčné mechanizmy alebo škodlivé správanie už známe a opísané vo vírusových databázach. Vykonáva sa po dokončení analýzy podpisov a poskytuje ochranu používateľom používajúcim antivírusové riešenia Dr.Web , proti hrozbám, ako je Trojan.Encoder.18 (známy aj ako „gpcode“) ransomware. Okrem toho využitie techniky Sledovanie pôvodu umožňuje výrazne znížiť počet falošných poplachov heuristického analyzátora. K menám hrozieb zistených pomocou Sledovanie pôvodu , je pridaný postfix.Pôvod.

Emulácia výkonu

Metóda emulácie spustenia programového kódu sa používa na detekciu polymorfných a šifrovaných vírusov, keď použitie vyhľadávania pomocou kontrolných súčtov podpisov nie je použiteľné alebo je výrazne komplikované z dôvodu nemožnosti skonštruovať spoľahlivé podpisy. Metóda spočíva v simulácii vykonávania analyzovaného kódu pomocou emulátor - softvérový model procesora a prostredia vykonávania programu. Emulátor pracuje s chránenou oblasťou pamäte (emulačný pufor). V tomto prípade sa inštrukcie neprenášajú do centrálneho procesora na skutočné vykonanie. Ak je kód spracovaný emulátorom infikovaný, výsledkom jeho emulácie bude obnovenie pôvodného škodlivého kódu, ktorý je k dispozícii na analýzu podpisov.

Heuristická analýza

Práca heuristického analyzátora je založená na množine heuristický (predpoklady, ktorých štatistická významnosť bola experimentálne potvrdená) o charakteristických znakoch škodlivého a naopak bezpečného spustiteľného kódu. Každá vlastnosť kódu má určitú váhu (t. j. číslo označujúce dôležitosť a spoľahlivosť tejto funkcie). Váha môže byť buď pozitívna, ak znak naznačuje prítomnosť správania škodlivého kódu, alebo negatívna, ak znak nie je charakteristický pre počítačové hrozby. Na základe celkovej váhy charakterizujúcej obsah objektu heuristický analyzátor vypočíta pravdepodobnosť, že obsahuje neznámy škodlivý objekt. Ak táto pravdepodobnosť prekročí určitú prahovú hodnotu, dôjde k záveru, že analyzovaný objekt je škodlivý.

Technológiu využíva aj heuristický analyzátor FLY-CODE™ – univerzálny algoritmus na rozbaľovanie súborov. Tento mechanizmus vám umožňuje vytvárať heuristické predpoklady o prítomnosti škodlivých objektov v objektoch komprimovaných baliacimi programami (packery), a to nielen v tých, ktoré poznajú vývojári produktov. Dr.Web , ale aj nové, doteraz neprebádané programy. Pri kontrole zabalených objektov sa využíva aj technológia analýzy ich štruktúrnej entropie, ktorá umožňuje odhaliť hrozby na základe umiestnenia sekcií ich kódu. Táto technológia umožňuje na základe jedného záznamu vo vírusovej databáze odhaliť množinu rôznych hrozieb zabalených do rovnakého polymorfného baliča.

Keďže heuristický analyzátor je systém na testovanie hypotéz v podmienkach neistoty, môže robiť chyby prvého typu (vynechanie neznámych hrozieb) aj druhého typu (rozpoznanie bezpečného programu ako škodlivého). Preto objekty označené heuristickým analyzátorom ako „škodlivé“ majú priradený stav „podozrivé“.

Počas akejkoľvek kontroly sú všetky súčasti antivírusových produktov Dr.Web používať najnovšie informácie o všetkých známych škodlivých softvéroch. Signatúry hrozieb a informácie o ich symptómoch a vzorcoch správania sa aktualizujú a pridávajú do vírusových databáz hneď, ako to špecialistiLekárske webové antivírusové laboratóriumodhaliť nové hrozby, niekedy až niekoľkokrát za hodinu. Aj keď najnovší malvér prenikne do vášho počítača a obíde rezidentnú ochranu Dr.Web , potom bude detekovaný v zozname procesov a neutralizovaný po prijatí aktualizovaných vírusových databáz.

Laboratórne metódy pri diagnostike vírusových infekcií zahŕňajú:

Izolácia a identifikácia patogénu;

Detekcia a stanovenie antivírusových AT titrov;

Detekcia Ag vírusov vo vzorkách študovaného materiálu;

Mikroskopické vyšetrenie preparátov testovaného materiálu.

Zber materiálu. Pri zbere materiálu na výskum musia byť splnené tieto podmienky:

Vzorky by sa mali odoberať čo najskôr alebo s prihliadnutím na rytmus obehu patogénu;

Materiál by sa mal vyberať v objeme dostatočnom pre celý komplex štúdií;

Vzorky by sa mali do laboratória doručiť ihneď, pri relatívne krátkodobom transporte (nie viac ako 5 dní) sa vzorky skladujú na ľade, pri teplote -50 °C.

Izolácia a kultivácia vírusov

Izolácia a identifikácia patogénu je „zlatým štandardom“ v diagnostike vírusových infekcií.

Bunková kultúra

Vírusy sa rozmnožujú iba v živých bunkách a izolácia patogénu v infikovanej bunkovej kultúre je jednou z hlavných metód diagnostiky vírusových infekcií. Keďže väčšina patogénnych vírusov sa vyznačuje tkanivovou a typovou špecifickosťou, je možné pre takmer každý vírus vybrať vhodné bunkové alebo tkanivové kultúry, ako aj vytvoriť štandardné kultivačné podmienky (prítomnosť buniek rovnakého typu). Reprodukciu vírusu zabezpečujú citlivé (permisívne) bunky. Preto, keď je izolovaný neznámy patogén, sú súčasne infikované 3-4 bunkové kultúry, za predpokladu, že jedna z nich môže byť permisívna. Bunkové kultúry sa získavajú dispergovaním príslušných orgánov a tkanív, častejšie sa však využívajú embryonálne tkanivá (ľudské a zvieracie) alebo transformované nádorové bunky. Keď sa bunkové kultúry umiestnia na vhodný rovný povrch, zvyčajne rastú ako monovrstva.

Primárne trypsinizované kultúry. Bunkové suspenzie sa získajú homogenizáciou zodpovedajúcich tkanív, vopred ošetrených trypsínom. Kultúry sú často reprezentované zmiešanými typmi buniek a nemožno ich rekultivovať. Životaschopnosť takýchto plodín je 2-3 týždne.

Semi-kontinuálne bunkové línie reprezentované diploidnými bunkami ľudí a zvierat. Kultúry majú obmedzenú vhodnosť na redisperziu a rast (zvyčajne nie viac ako 20-30 opätovných výsevov), pričom si zachovávajú životaschopnosť a neprechádzajú spontánnou transformáciou.

Kontinuálne bunkové línie(heteroploidné kultúry) predstavujú bunky podrobené dlhodobej kultivácii a spontánnym transformáciám. Kultúry sú schopné opakovanej disperzie a transplantácie. Práca s nimi je menej náročná na prácu v porovnaní s prípravou primárnych plodín; Transplantované bunky sú relatívne identické vo svojej morfológii a stabilné vo vlastnostiach.

Orgánové kultúry

Nie všetky typy buniek sú schopné rásť ako monovrstva, v niektorých prípadoch je udržanie diferencovaných buniek možné len v orgánovej kultúre. Zvyčajne ide o suspenziu tkaniva, ktorá má špecializovanú funkciu, označovanú aj ako prežívajúca tkanivová kultúra.

Kuracie embryá

Kuracie embryá sú takmer ideálnymi modelmi na kultiváciu určitých vírusov (napríklad chrípky a osýpok). Uzavretá dutina embrya zabraňuje prenikaniu mikroorganizmov zvonku, ako aj rozvoju spontánnych vírusových infekcií. Embryá sa používajú na primárnu izoláciu vírusov z patologického materiálu; na ich pasážovanie a uchovanie, ako aj na získanie požadovaných množstiev vírusu. Niektoré patogény (napríklad herpes vírusy) spôsobujú charakteristické zmeny (ochorenie sa podľa nich dá rozpoznať). Infekcia sa uskutočňuje na chorion-alantoidnej membráne, v amniotickej alebo alantoidnej dutine alebo v žĺtkovom vaku.

Infekcia chorion-alantoidnej membrány. Zvyčajne sa používajú embryá staré 10-12 dní. Vajíčka sa prezerajú v prechádzajúcom svetle, zaznamená sa umiestnenie vzduchového vaku a vyberie sa oblasť bez krvných ciev. Opatrne odstráňte úlomok škrupiny, uvoľnite vonkajší obal a jemným tlakom ho odlúpnite. Potom sa na okraji vzduchového vaku vytvorí otvor. Pri nasávaní cez tento otvor sa chorion-alantoidná membrána odlúpne z vonkajšej membrány. Aplikuje sa naň testovaný materiál bez baktérií a prvokov (prejde cez bakteriálne filtre a ošetrí baktericídmi).

Infekcia v amniotickej dutine. Typicky sa používajú embryá staré 7-14 dní, pri ktorých sa po oddelení chorio-alantoidnej membrány (pozri vyššie) otvor roztiahne, amniotická membrána sa chytí pinzetou a vyberie sa cez chorio-alantoidnú membránu. Prostredníctvom nej sa testovací materiál zavádza do amniotickej dutiny.

Infekcia v alantoickej dutine. 10-dňové embryá sa infikujú cez otvory vytvorené v škrupine a pod nimi ležiacich membránach (pozri vyššie).

Infekcia v žĺtkovom vaku. Používajú sa 3-8 dňové embryá, u ktorých v tomto veku žĺtkový vak zaberá takmer celú dutinu vajíčka. Infekcia sa uskutočňuje cez otvor vytvorený vo vzduchovom vaku

Pozorovanie a zaznamenávanie výsledkov. Ako materiál obsahujúci vírus sa môže použiť obsah žĺtkového vaku, alantoická a plodová voda alebo celé embryo, rozrezané na kúsky spolu s okolitými tkanivami. Identifikovať charakteristické lézie na chorione vyvíjajúceho sa kuracieho embrya.

Plášť a vonkajšia membrána sú odstránené z alantoickej membrány. Potom sa membrána odstráni a umiestni sa do sterilnej vody. Povaha lézií sa študuje na tmavom pozadí.

Zvieracie modely

Ak nie je možné izolovať a identifikovať vírus pomocou štandardných metód in vitro infekčný materiál sa podáva zvieratám citlivým na patogén a po rozvinutí typického infekčného procesu sa citlivé bunkové kultúry opätovne infikujú. Najčastejšie sa používajú myši, králiky a opice; Na izoláciu niektorých vírusov (napríklad vírusov Coxsackie) sa infikujú dojčiace myši. Kvôli vysokým nákladom a zložitosti chovu laboratórnych zvierat boli takmer všade nahradené bunkovými kultúrami. Napriek tomu sa zvieracie modely aktívne používajú na štúdium charakteristík patogenézy a tvorby imunitných reakcií počas vírusových infekcií.

Identifikácia vírusov

Kvalitatívna definícia

Prítomnosť a biologická aktivita vírusov je určená účinkami pozorovanými na zvieracích modeloch (zvýšená telesná teplota, objavenie sa charakteristických klinických príznakov, smrť atď.), kuracích embryí a buniek (v kultúrach). Pod vplyvom špecifických vírusov sú možné zmeny morfológie, rastu, reprodukcie buniek alebo ich deštrukcia. Skutočnosť reprodukcie vírusu v citlivých bunkách in vitro podmienené cytopatickými účinkami (vrátane tvorby plakov, inklúznych teliesok), fenoménom hemadsorpcie a „farebnej reakcie“.

Cytopatické účinky hodnotené mikroskopiou bunkových kultúr. Na základe stupňa poškodenia buniek sa rozlišujú vírusy s vysokou alebo strednou cytopatogenitou. Reprodukcia vírusov v bunkových kultúrach je sprevádzaná poruchami v morfológii jednovrstvových buniek. Niektoré vírusy spôsobujú charakteristické cytopatické zmeny, čo (berúc do úvahy klinický obraz ochorenia) umožňuje rýchlo stanoviť predbežnú diagnózu. Napríklad reprodukcia paramyxovírusov (vírusy osýpok, mumpsu, PC vírus) je sprevádzaná objavením sa charakteristických obrovských viacjadrových buniek; adenovírusy spôsobujú tvorbu zhlukov veľkých okrúhlych buniek a pri rozmnožovaní herpetických vírusov sú bunky okrúhleho tvaru difúzne umiestnené v celej monovrstve.

Tvorba plakov.„Plaky“ sa nazývajú negatívne kolónie – oblasti zničených buniek, ktoré vyzerajú ako čistiace zóny na monovrstvách buniek pokrytých vrstvou agaru. V niektorých prípadoch sú dávka a cytopatogenita vírusu vyjadrené v jednotkách tvoriacich plaky (PFU).

Inklúzne telieska. Mnohé vírusy spôsobujú výskyt charakteristických útvarov v infikovaných bunkách - akumulácie vírusových proteínov alebo častíc viditeľných pod svetelným mikroskopom. Inklúzne telieska sa môžu nachádzať ako v cytoplazme (Guarneriho telieska v kiahňach), tak aj v jadrách buniek (adenovírusy).

Žiadny cytopatický účinok. Niektoré vírusy (napríklad vírus rubeoly) nevykazujú cytopatický účinok. Môžu byť detekované interferenciou iného vírusu, ktorý môže spôsobiť degeneráciu infikovaných buniek.

Fenomén hemadsorpcie. Mnohé bunky infikované vírusmi získavajú schopnosť sorbovať rôzne červené krvinky na svojom povrchu. Fenomén hemadsorpcie má spoločné mechanizmy s hemaglutináciou a prejavuje sa v skorých štádiách, pred prejavom cytopatického účinku, pri jeho absencii alebo slabej expresii.

"Farebná reakcia". Do kultivačného média používaného na udržiavanie buniek sa pridá indikátor. Rast buniek je sprevádzaný akumuláciou metabolitov, posunom pH média a zmenou farby indikátora. Infekcia kultúr vírusom prudko inhibuje bunkový metabolizmus a médium si zachováva svoju pôvodnú farbu.

Expresná diagnostika. Na rýchlu identifikáciu vírusovej infekcie boli vyvinuté mnohé rýchle diagnostické metódy založené na detekcii vírusových Ag. Napríklad na včasnú diagnostiku HIV infekcie sa široko používa ELISA, ktorá deteguje povrchový Ar vírusu.

kvantifikácia

Kvantitatívne stanovenie vírusov sa uskutočňuje dvoma spôsobmi - štúdiom infekčnosti a kvantitatívnym stanovením vírusových Ag. Stanovenie titrov vírusovej infekčnosti do značnej miery závisí od metódy kvantitatívneho testu; bakteriofágy majú vzťah infekčnosť-častica je približne 1 (to znamená, že každá vírusová častica je schopná spôsobiť infekciu), pre zvieracie vírusy je tento pomer 1:10 (niekedy vyšší v dôsledku vírusovo-inhibičného účinku faktorov rezistencie).

Stanovenie infekčnosti vírusov. Najdostupnejšou formou kvantitatívneho stanovenia je počítanie počtu vírusových „plakov“. Priame testy infekčnosti sa používajú na stanovenie infekčnej dávky (ID) alebo letálnej dávky (LD) skúmaného vírusu (zvyčajne vyjadrenej v lg). ID 50 - riedenie infikujúce 50 % buniek; LD 50 - riedenie, ktoré zabije 50 % postihnutých buniek alebo zvierat.

Detekcia vírusových Ag a vírusových častíc. Najbežnejšou metódou je kvantitatívna hemaglutinačná reakcia. Metóda je založená na schopnosti vírusov adsorbovať sa na povrchu zvieracích a ľudských erytrocytov. Kvantitatívna elektrónová mikroskopia sa používa na počítanie celkového počtu vírusových (ale nie infekčných) častíc v testovanom objekte (napríklad kultivačnej tekutine).

Morfológia vírusov

Štúdium morfológie vírusov je možné iba pomocou elektrónovej mikroskopie, ale najčastejšie táto metóda nie je dostupná kvôli nedostatku takého drahého a zložitého nástroja. Navyše mnohé patogény sú morfologicky podobné, čo znižuje hodnotu tejto metódy. Najbežnejšou metódou je mikroskopovanie obsahu vezikúl a tkanivových extraktov ošetrených farbivami (negatívny kontrast), po ktorom nasleduje počítanie DNA alebo RNA obsahujúcich vírusy. Elektrónová mikroskopia dokáže rýchlo odhaliť orto- a paramyxovírusy v respiračných sekrétoch, herpesvírusy vo vezikulárnej tekutine a rotavírusy vo výkaloch.

Metódy sérologickej identifikácie

Väčšina vírusových infekcií vyvíja imunitné reakcie, ktoré sa používajú na diagnostiku. Bunkové odpovede sa zvyčajne hodnotia v testoch cytotoxicity lymfocytov proti infekčným agens alebo cieľovým bunkám nimi infikovaným, alebo sa stanovuje schopnosť lymfocytov reagovať na rôzne Ag a mitogény. V praktických laboratóriách sa závažnosť bunkových reakcií určuje len zriedka. Metódy identifikácie antivírusových AT sa rozšírili.

RN je založená na potlačení cytopatogénneho účinku po zmiešaní vírusu so špecifickými AT. Neznámy vírus sa zmieša so známymi komerčnými antisérami a po vhodnej inkubácii sa pridá k bunkovej monovrstve. Neprítomnosť bunkovej smrti naznačuje nesúlad medzi infekčným agens a známymi AT.

Inhibícia hemaglutinácie. RTGA sa používa na identifikáciu vírusov, ktoré môžu aglutinovať rôzne červené krvinky. Za týmto účelom zmiešajte kultivačné médium obsahujúce patogén so známym komerčným antisérom a pridajte ho do bunkovej kultúry. Po inkubácii sa stanoví schopnosť kultúry hemaglutinovať a v neprítomnosti sa urobí záver, že vírus sa nezhoduje s antisérom.

Inhibícia cytopatického účinku vírusovou interferenciou. Reakcia inhibície cytopatického účinku v dôsledku interferencie vírusov sa používa na identifikáciu patogénu, ktorý interferuje so známym cytopatogénnym vírusom v kultúre citlivých buniek. Na tento účel sa do kultivačného média obsahujúceho skúmaný vírus (napríklad do vírusu rubeoly, ak je podozrenie) pridá komerčné sérum, inkubuje sa a infikuje sa druhá kultúra; po 1-2 dňoch sa do nej zavedie známy cytopatogénny vírus (napríklad akýkoľvek ECHO vírus). Ak je prítomný cytopatogénny účinok, usudzuje sa, že prvá kultúra bola infikovaná vírusom zodpovedajúcim použitej AT.

Priama imunofluorescencia. Spomedzi iných testov je najpoužívanejšia priama imunofluorescenčná reakcia (najrýchlejšia, najcitlivejšia a reprodukovateľná). Napríklad identifikácia CMV podľa jeho cytopatogénneho účinku si vyžaduje minimálne 2-3 týždne a pri použití značeného monoklonálneho AT je identifikácia možná do 24 hodín. inkubované, zmyté z nenaviazaného činidla a skúmané pomocou fluorescenčnej mikroskopie (umožňuje zistiť prítomnosť fluorescencie v infikovaných bunkách).

Imunoelektrónová mikroskopia(podobne ako v predchádzajúcej metóde) vám umožňuje identifikovať rôzne typy vírusov identifikovaných elektrónovou mikroskopiou (napríklad rôzne typy herpetických vírusov), čo nie je možné vykonať na základe morfologických znakov. Namiesto antisér sa na identifikáciu používajú rôzne značené AT, ale zložitosť a vysoká cena metódy obmedzujú jej použitie.

Detekcia antivírusových AT v sére

Jednoduchším a dostupnejším prístupom je detekcia antivírusových AT v sére. Vzorky krvi sa musia odobrať dvakrát: ihneď po objavení sa klinických príznakov a po 2-3 týždňoch. Mimoriadne Je dôležité vyšetriť presne dve vzorky séra. Výsledky jedinej štúdie nemožno považovať za presvedčivé z dôvodu nemožnosti spojiť výskyt AT s týmto prípadom. Je možné, že tieto AT cirkulujú po predchádzajúcej infekcii. V takejto situácii možno len ťažko preceňovať úlohu štúdia séra získaného v období rekonvalescencie. Prítomnosť ochorenia počas obdobia prvej vzorky je indikovaná aspoň štvornásobné zvýšenie titra AT, identifikované počas štúdie druhej vzorky.

Metódy uvedené nižšie neumožňujú rozlíšenie AT vytvorených počas choroby a cirkulujúcich po zotavení (trvanie tohto obdobia sa pri rôznych infekciách líši). Keďže pre adekvátnu diagnózu je potrebné potvrdiť signifikantný nárast AT titrov v dvoch vzorkách, prvá vzorka sa vyšetruje v akútnej fáze a druhá v období rekonvalescencie (po 2-3 týždňoch). Získané výsledky majú retrospektívny charakter a sú vhodnejšie na vykonávanie epidemiologických prieskumov.

RTGA deteguje AT syntetizované proti hemaglutinínom vírusov (napríklad vírusu chrípky). Metóda uľahčuje detekciu podobných AT v sére pacienta.

RSK- hlavná metóda sérodiagnostiky vírusových infekcií (medzi dostupnými). Reakcia deteguje komplement fixujúce IgM a IgG, ale nerozlišuje ich; Na optimalizáciu získaných výsledkov si príprava reakcie vyžaduje určité zručnosti personálu.

REEF. Ak je možné získať biopsiu infikovaného tkaniva a sú dostupné komerčné súpravy AT značené fluoresceínom, diagnózu možno potvrdiť priamou imunofluorescenciou. Reakcia zahŕňa inkubáciu študovaného tkaniva s AT, ich následné odstránenie a fluorescenčnú mikroskopiu vzorky.

Imunosorpčné metódy(napríklad ELISA a RIA) sú informatívnejšie, pretože detegujú IgM a IgG oddelene, čo umožňuje vyvodiť určité závery o dynamike infekčného procesu alebo o stave rekonvalescencie. Na detekciu AT sa známy Ag sorbuje na pevný substrát (napríklad na steny skúmaviek, plastové mikroplatničky, Petriho misky) a pridávajú sa rôzne riedenia pacientovho séra. Po vhodnej inkubácii sa nenaviazané AT odstránia a pridá sa antisérum lgčloveka, značeného enzýmom, zopakujte postup inkubácie a premytia nenaviazaného AT a pridajte nejaký chromogénny substrát (citlivý na pôsobenie enzýmu). Keďže zmena farby je úmerná obsahu špecifických AT, je celkom možné určiť ich titer spektrofotometricky. V diagnostike infekcie HIV je najpoužívanejšou metódou imunoblotting.

Detekcia vírusových Ag

ELISA. V súčasnosti sa už objavili komerčné súpravy na identifikáciu Ag z niektorých patogénov, ktoré umožňujú ich identifikáciu v priebehu 5-10 minút. Na detekciu Ag sa známe AT sorbujú na pevnú fázu a pridá sa sérum obsahujúce Ag; Po inkubácii sa nenaviazané Ag dekantuje, systém sa premyje a pridá sa značený AT, špecifický pre sorbovaný AT. Postup inkubácie a premývania sa opakuje, pridáva sa chromogénny substrát, pri zmene farby systému sa zaznamená pozitívny výsledok.

hybridizácia DNA- vysoko špecifická metóda, ktorá umožňuje identifikovať genóm vírusu po jeho hybridizácii s komplementárnymi molekulami DNA. Ako markery sa používajú enzýmy a izotopy. Metóda určuje schopnosť vírusovej DNA hybridizovať so značenou komplementárnou DNA; špecifickosť metódy je priamo úmerná dĺžke I komplementárneho reťazca. Sľubná je metóda in situ hybridizácie nukleových kyselín. Na nastavenie reakcie sa značená DNA aplikuje na tkanivové biopsie (vrátane biopsií fixovaných vo formalíne alebo zapustených do parafínových blokov) a zaznamenáva sa interakcia s komplementárnou DNA. Metóda sa používa na detekciu vírusov herpes simplex, ľudského papilómu, Epstein-Barrovej atď.

PCR. Metóda výrazne zvyšuje citlivosť hybridizačnej metódy, zvyšuje obsah vírusovej DNA v materiáli získanom od pacienta a tiež urýchľuje čas na získanie výsledkov.



Inštrukcie

Prítomnosť vírusu môže byť primárne indikovaná zjavnými príznakmi. Na obrazovke sa napríklad objavia správy alebo sa otvárajú nevyžiadané internetové stránky. Ak sa vo vašom počítači usadil trójsky kôň, môžete sa stretnúť so zjavnými prejavmi prítomnosti vírusu.

Okrem toho môžete hádať, že počítač je infikovaný skrytými znakmi. To znamená, že samotné vírusy sú nenápadné, ale o ich prítomnosti sa môžete dozvedieť, ak sa pozriete do registra.

Okrem toho existujú nepriame známky prítomnosti škodlivého softvéru. Táto kategória „príznakov“ zahŕňa náhle zamrznutie spusteného programu, objavenie sa neznámeho chybového hlásenia na obrazovke a iné prejavy.

Ak chcete nájsť vírus bez antivírusu, stlačte kombináciu klávesov Shift+Ctrl+Esc alebo Alt+Ctrl+Delete: na obrazovke sa otvorí správca úloh (má štyri stĺpce). Pozrite si obsah prvého stĺpca – „Názov recenzie“: tu uvidíte informácie o prebiehajúcich podozrivých alebo nepodozrivých procesoch. Každý používateľ PC má inú sadu základných procesov, takže sa uistite, že neexistujú žiadne pochybné dodatočné operácie.

Vírusy sa často spúšťajú. Ak chcete nájsť spúšťacie súbory, otvorte ponuku Štart, kliknite na kartu Všetky programy a vyberte možnosť Spustenie. Škodlivý softvér môžete nájsť aj pomocou softvéru CCleaner alebo Auslogics.

Otvorte systémový nástroj msconfig.exe: kliknite na „Štart“, potom kliknite na kartu „Spustiť“ a potom napíšte názov aplikácie, ktorú chcete otvoriť. K dispozícii je tiež karta „Služby“, ktorá obsahuje tie systémové komponenty, ktoré sa spustia po zapnutí osobného počítača. Tento zoznam môže obsahovať aj malvér.

Poznámka

Vírusy nie sú vtip: nezabudnite si nainštalovať antivírus.

Užitočné rady

Pred odstránením súboru sa uistite, že je skutočne sporný.

Súvisiaci článok

Zdroje:

• Príznaky infekcie počítačovým vírusom
• ako odstrániť vírus bez antivírusu

Poznáte modré okno, ktoré blokuje celú obrazovku a žiada vás o odoslanie SMS na odomknutie počítača? A bolestivá práca na internete, keď nič nesťahujete a počítadlo návštevnosti trasie megabajty niektorých dát? Alebo možno exe súbory prestanú bežať jeden po druhom? Ak áno, musíte vírus urýchlene odstrániť!

Inštrukcie

Ak nie je možné odstrániť ani priečinok, skúste zmeniť jeden z jeho názvov. Kliknite pravým tlačidlom myši na ikonu priečinka a v kontextovej ponuke vyberte možnosť „Premenovať“ a potom zadajte nový upravený názov. Potom skúste priečinok znova odstrániť.

Ak ste vykonali operácie opísané vyššie, ale priečinok sa neodstráni, použite bezplatnú pomôcku Unlocker. Tento program vám umožňuje spracovávať súbory a priečinky, ktoré sú pre používateľa zablokované. Po inštalácii Unlocker kliknite pravým tlačidlom myši na priečinok, ktorý chcete odstrániť, a vyberte „Unlocker“. V dialógovom okne programu uvidíte zoznam systémových procesov, ktoré bránia vymazaniu priečinka. Ukončite tieto procesy a potom odstráňte súbor.

Unlocker dokáže vymazať súbory a priečinky, ktoré používa iná aplikácia, ako aj prístup ku ktorým je zablokovaný alebo zakázaný. Unlocker funguje aj v prípadoch, keď je disk plný alebo chránený proti zápisu, keď je súbor používaný iným programom a keď je prerušené zdieľanie adresárov.

Počítačový vírus je program, ktorý poškodzuje počítač. Môže vykonávať rôzne akcie bez povolenia používateľa. Vrátane blokovania činnosti konkrétneho programu alebo celého operačného systému. Vírusov sa musíte čo najrýchlejšie zbaviť.

Budete potrebovať

• -antivírus;
• - bezplatné liečebné pomôcky;
• - program procexp;
• - LiveCD;
• - pevný disk s nainštalovaným OS.

Inštrukcie

Ak neblokuje prácu s počítačom, spustite nainštalovaný antivírus. Nastavte skenovanie všetkých pevných diskov. Vrátane odnímateľných alebo . Ak sa nájde vírus, program ponúkne jeho vyliečenie, umiestnenie do karantény alebo odstránenie. Ak ste si istí, že ste takýto program do počítača nenainštalovali, vyberte možnosť odinštalovať.

Tam uvidíte súbor hosts. Otvorte ho pomocou poznámkového bloku. Vymažte všetko za riadkom 127.0.0.1 localhost. Uložte zmeny. Potom reštartujte počítač. Vírus bude odstránený. Potom pre každý prípad skontrolujte počítač pomocou akéhokoľvek antivírusu.

Ak je v strede pracovnej plochy banner, ktorý vám bráni v práci, musíte sa prihlásiť do počítača v núdzovom režime. Potom spustite akýkoľvek antivírusový alebo liečebný nástroj. Odstráňte všetky nájdené vírusy a spustite počítač ako zvyčajne.

Ak banner nepokrýva celú plochu, môžete ho odstrániť ručne. Nainštalujte program procexp. Spustite to. Presuňte ho tak, aby boli viditeľné všetky spustené procesy. Nájdite vírus. Spravidla vyniká v žiarivej farbe. Nájdite priečinok, kde sa nachádza.

Prejdite do tohto priečinka. Zviditeľnite všetky neviditeľné priečinky. Odstráňte vírus a vyprázdnite kôš. Táto možnosť je vhodná len pre bežné načítanie operačného systému. Ak ste prihlásení do núdzového režimu, vírus bude neaktívny. A preto ho neuvidíte.

Ak nie je možné vykonať žiadnu akciu, musíte spustiť operačný systém z iného disku. Spustite OS z LiveCD. Spustite úplnú kontrolu vírusov pomocou antivírusového alebo čistiaceho nástroja. Odstráňte vírus.

Pripojte ďalší pevný disk s nainštalovaným operačným systémom. Spustite z neho OS. Skontrolujte všetky pevné disky pomocou antivírusového alebo čistiaceho nástroja. Odstráňte vírus.

Video k téme

Poznámka

Hneď ako zistíte, že sa vo vašom počítači nachádza vírus, odpojte ho od lokálnej siete, ak existuje.

Užitočné rady

Nezastavujte antivírus, kým sa nedokončí úplná kontrola všetkých diskov.

Zdroje:

• Ako sa zbaviť vírusov bez antivírusových programov

Ak používate počítač veľmi dlho bez antivírusového programu, no napriek tomu sa rozhodnete nainštalovať antivírus, je vysoká pravdepodobnosť, že počítač už obsahuje vírusy, ktoré je potrebné odstrániť. Aj keď máte nainštalovaný antivírusový program, z času na čas musíte skontrolovať váš systém na prítomnosť vírusov a ak sa nájdu, odstrániť ich. Neprítomnosť vírusov vo vašom počítači robí systém stabilným a zaručuje bezpečnosť vašich osobných súborov.

Budete potrebovať

• Osobný počítač, antivírusový program ESET NOD32

Inštrukcie

Ďalšie pokyny na odstránenie vírusov budú uvedené na príklade antivírusového programu ESET NOD32. Tento antivírus si môžete stiahnuť z oficiálnej stránky spoločnosti ESET. K dispozícii je úplne bezplatná triviálna verzia s bezplatnou skúšobnou dobou jeden mesiac.

Po inštalácii NOD32 sa na lište operačného systému objaví ikona programu. Musíte vstúpiť do ponuky programu. Ak to chcete urobiť, dvakrát kliknite na ikonu programu. V zobrazenej ponuke vyberte súčasť „Skenovanie počítača“ a v nasledujúcom okne vyberte možnosť „Vlastné skenovanie“.

Ďalej musíte vybrať objekty na skenovanie. Ako ciele skenovania označte všetky oddiely pevného disku, pamäť RAM a dokonca aj virtuálne jednotky počítača (ak existujú). Teraz venujte pozornosť oknám: „Profil skenovania“. Neďaleko je šípka. Kliknite naň. Otvorí sa zoznam profilov skenovania. Vyberte položku Deep Scan. Po nastavení všetkých možností skenovania počítača kliknite na „Skenovať“.

Počkajte na dokončenie operácie skenovania. Potom sa otvorí protokol obsahujúci výsledky kontroly. Zobrazí sa zoznam nájdených vírusov. Oproti typu vírusu bude šípka, kliknutím na ktorú sa otvorí zoznam možných akcií. V zozname akcií vyberte možnosť „Odstrániť“. Potom kliknite na „Spustiť“ v spodnej časti okna. Potom bude odstránený z počítača. Týmto spôsobom môžete odstrániť všetky vírusy nájdené programom.

Ak sa medzi infikovanými súbormi nachádza súbor, ktorý je potrebný na normálnu prevádzku operačného systému, nebudete ho môcť odstrániť. Po výbere akcie „Odstrániť“ sa zobrazí správa: „Vymazanie nie je možné“. Vírus bude umiestnený do karantény a izolovaný. Počas karantény sa nebude šíriť a infikovať ďalšie súbory.

Video k téme

Vírusy a malvér blokujú plnú prevádzku vášho osobného počítača. Ak chcete chrániť svoj počítač, musíte použiť antivírus. Ale ak nemáte antivírus, môžete sa bez neho vyrovnať.

Inštrukcie

Ak vírusový program Winlock vstúpil do operačného systému vášho osobného počítača, môžete sa s ním vyrovnať bez toho, aby ste sa uchýlili k pomoci antivírusového softvéru. Použite funkciu Obnovovanie systému počítača. Ak je k dispozícii ponuka Štart, otvorte „Štart“ - „Všetky programy“ - „Príslušenstvo“ a vyberte „Obnovenie systému“. Zadajte bod „vrátenia“ (táto značka sa nastaví automaticky s určitým obdobím, ale môžete si ho nastaviť sami) a kliknite na „Ďalej“. Začne sa proces „vrátenia“ systému na určité časové obdobie.
Po tejto operácii bude vírus odstránený z vášho počítača.

Ak vírus zablokoval pracovnú plochu vášho osobného počítača, môžete spustiť „Obnovenie systému“ cez príkazový riadok. Stlačením klávesových skratiek Ctrl+Alt+Delete otvorte Správcu úloh. V zobrazenom dialógovom okne kliknite na odkaz „Súbor“ - „Nová úloha (Spustiť...)“. Zadajte príkaz „cmd.exe“. Zobrazí sa okno príkazového riadka. Teraz musíte zadať nasledovné: %systemroot%system32
estore
strui.ex a stlačte „Enter“. Spustí sa automatické obnovenie systému.

Detekcia založená na podpisoch je metóda, kedy antivírusový program pri skenovaní súboru pristupuje k antivírusovým databázam zostaveným výrobcom antivírusového programu. Ak sa ktorákoľvek časť kódu prezeraného programu zhoduje so známym vírusovým kódom (podpisom) v databázach, antivírusový program môže na požiadanie vykonať jednu z nasledujúcich akcií:

• 1. Odstráňte infikovaný súbor.
• 2. Zablokujte prístup k infikovanému súboru.
• 3. Pošlite súbor do karantény (to znamená zneprístupnite ho na vykonanie, aby ste zabránili ďalšiemu šíreniu vírusu).
• 4. Skúste súbor „vyliečiť“ odstránením tela vírusu zo súboru.
• 5. Ak liečba/odstránenie nie je možné, vykonajte tento postup pri ďalšom reštartovaní operačného systému.

Aby takýto antivírusový program mohol dlhodobo úspešne fungovať, je potrebné pravidelne sťahovať údaje o nových vírusoch do vírusovej databázy (zvyčajne cez internet). Ak bdelí a technicky zdatní používatelia identifikujú vírus v jeho stopách, môžu poslať infikované súbory vývojárom antivírusových programov, ktorí potom do svojich databáz pridajú informácie o nových vírusoch. Mnoho antivírusových programov založených na podpisoch kontroluje súbory, keď operačný systém vytvára, otvára, zatvára alebo odosiela súbory poštou. teda

Detekcia anomálií je metóda, pri ktorej sa antivírusy využívajúce metódu zisťovania podozrivého správania programov nesnažia identifikovať známe vírusy, namiesto toho sledujú správanie všetkých programov. Ak sa program pokúsi zapísať nejaké údaje do spustiteľného súboru (súbor .EXE), antivírusový program môže súbor označiť, varovať používateľa a opýtať sa, čo má robiť.

V súčasnosti sa takéto preventívne metódy na zisťovanie škodlivého kódu v tej či onej forme široko používajú ako modul antivírusového programu, a nie ako samostatný produkt.

Ďalšie názvy: proaktívna ochrana, blokátor správania, systém prevencie vniknutia hostiteľa (HIPS).

Na rozdiel od metódy hľadania zhody s definíciou vírusu v antivírusových databázach metóda zisťovania podozrivého správania poskytuje ochranu pred novými vírusmi, ktoré ešte nie sú v antivírusových databázach. Treba však vziať do úvahy, že programy alebo moduly postavené na tejto metóde tiež produkujú veľké množstvo varovaní (v niektorých prevádzkových režimoch), vďaka čomu je používateľ menej náchylný na všetky varovania. Tento problém sa v poslednej dobe zhoršil, pretože sa objavilo stále viac programov bez škodlivého softvéru, ktoré upravujú iné súbory exe, napriek existujúcemu problému falošných varovaní. Napriek prítomnosti veľkého počtu varovných dialógov moderný antivírusový softvér používa túto metódu čoraz viac.

Detekcia založená na emulácii je technika, pri ktorej sa niektoré antivírusové programy pokúšajú simulovať začiatok spúšťania kódu každého nového volaného programu pred tým, ako naň prenesú kontrolu. Ak program používa samomodifikačný kód alebo sa prejaví ako vírus (teda napríklad okamžite začne hľadať iné súbory .EXE), bude takýto program považovaný za škodlivý, schopný infikovať ďalšie súbory. Táto metóda je však tiež plná veľkého množstva falošných varovaní.

Metóda White List je bežná antimalvérová technika nazývaná white list. Namiesto hľadania iba známeho škodlivého softvéru táto technológia zabraňuje spusteniu všetkých počítačových kódov okrem tých, ktoré boli predtým správcom systému označené ako bezpečné. Výberom tejto predvolenej možnosti odhlásenia sa môžete vyhnúť obmedzeniam, ktoré sú vlastné aktualizáciám vírusových signatúr. Navyše tie aplikácie v počítači, ktoré správca systému nechce nainštalovať, sa nespustia, pretože nie sú na bielej listine. Pretože dnešné podniky majú veľa dôveryhodných aplikácií, zodpovednosť za obmedzenie používania tejto technológie spočíva na systémových administrátoroch a ich zoznamoch dôveryhodných aplikácií. Práca antivírusových programov s touto technológiou zahŕňa nástroje na automatizáciu zoznamu a prevádzky akcií s „bielym zoznamom“.

Takmer všetky moderné antivírusové nástroje využívajú technológiu heuristickej analýzy programového kódu. Heuristická analýza sa často používa v spojení so skenovaním podpisov na vyhľadávanie komplexných šifrovaných a polymorfných vírusov. Technika heuristickej analýzy umožňuje odhaliť predtým neznáme infekcie, avšak liečba v takýchto prípadoch je takmer vždy nemožná.

V tomto prípade je spravidla potrebná dodatočná aktualizácia antivírusových databáz na získanie najnovších podpisov a liečebných algoritmov, ktoré môžu obsahovať informácie o predtým neznámom víruse. V opačnom prípade sa súbor odošle na preskúmanie antivírusovým analytikom alebo autorom antivírusových programov.

Metódy virologického výskumu sú tiež založené na imunologických procesoch (interakcia antigénu s protilátkami), biologických vlastnostiach vírusu (schopnosť hemaglutinácie, hemolýzy, enzymatická aktivita), vlastnostiach interakcie vírusu s hostiteľskou bunkou (povaha cytopatického účinku, tvorba intracelulárne inklúzie atď.).

Pri diagnostike vírusových infekcií, pri kultivácii, izolácii a identifikácii vírusov, ako aj pri výrobe vakcínových prípravkov sa široko používa metóda bunkových kultúr. Na izoláciu vírusov sa používa infekcia vnímavých laboratórnych zvierat a kuracích embryí, najčastejšie sa však používa tkanivová kultúra. Prítomnosť vírusu je zvyčajne určená špecifickou degeneráciou buniek (cytopatický účinok), tvorbou sympplastov a syncýcií, detekciou intracelulárnych inklúzií, ako aj špecifickým antigénom detekovaným pomocou imunofluorescencie, hemadsorpcie, hemaglutinácie (pre hemaglutinujúce vírusy) atď. . Tieto príznaky možno zistiť až po 2-3 prechodoch vírusom.

Na izoláciu množstva vírusov, ako sú vírusy chrípky, sa používajú kuracie embryá a na izoláciu niektorých vírusov Coxsackie a množstva arbovírusov sa používajú novonarodené myši. Identifikácia izolovaných vírusov sa uskutočňuje pomocou sérologických reakcií a iných metód.

Pri práci s vírusmi sa určuje ich titer. Titrácia vírusov sa zvyčajne uskutočňuje v bunkovej kultúre, pričom sa určuje najvyššie riedenie tekutiny obsahujúcej vírus, pri ktorej dochádza k degenerácii tkaniva, tvoria sa inklúzie a vírusovo špecifické antigény. Plakovú metódu možno použiť na titráciu množstva vírusov. Plaky alebo negatívne kolónie vírusov sú ložiská buniek zničených vírusom v jednovrstvovej tkanivovej kultúre pod agarovým povlakom. Počítanie kolónií umožňuje kvantitatívnu analýzu infekčnej aktivity vírusov na základe toho, že jedna infekčná vírusová častica tvorí jeden plak. Plaky sa detegujú farbením kultúry intravitálnymi farbivami, zvyčajne neutrálnou červenou; plaky neadsorbujú farbivo, a preto sú viditeľné ako svetlé škvrny na pozadí zafarbených živých buniek. Titer vírusu je vyjadrený ako počet jednotiek tvoriacich plak na ml.

Purifikácia a koncentrácia vírusov sa zvyčajne uskutočňuje diferenciálnou ultracentrifugáciou nasledovanou koncentráciou alebo centrifugáciou v hustotnom gradiente. Na čistenie vírusov sa používajú imunologické metódy, iónomeničová chromatografia, imunosorbenty atď.

Laboratórna diagnostika vírusových infekcií zahŕňa detekciu patogénu alebo jeho zložiek v klinickom materiáli; izolácia vírusu z tohto materiálu; sérodiagnostika. Výber laboratórnej diagnostickej metódy v každom jednotlivom prípade závisí od povahy ochorenia, obdobia ochorenia a možností laboratória. Moderná diagnostika vírusových infekcií je založená na expresných metódach, ktoré umožňujú získať odpoveď už niekoľko hodín po odbere klinického materiálu v skorých štádiách po ochorení. Patrí medzi ne elektrónová a imunitná elektrónová mikroskopia, ako aj imunofluorescencia, metóda molekulárnej hybridizácie , detekcia protilátok triedy IgM atď.

Elektrónová mikroskopia negatívne zafarbených vírusov umožňuje rozlíšiť vírusy a určiť ich koncentráciu. Použitie elektrónovej mikroskopie pri diagnostike vírusových infekcií je obmedzené na prípady, keď je koncentrácia vírusových častíc v klinickom materiáli pomerne vysoká (105 v 1 ml a vyššia). Nevýhodou metódy je neschopnosť rozlíšiť vírusy patriace do rovnakej taxonomickej skupiny. Tento nedostatok je prekonaný použitím imunitnej elektrónovej mikroskopie. Metóda je založená na tvorbe imunitných komplexov pridaním špecifického séra k vírusovým časticiam za súčasnej koncentrácie vírusových častíc, čo umožňuje ich identifikáciu. Metóda sa používa aj na detekciu protilátok. Na expresné diagnostické účely sa vykonáva elektrónové mikroskopické vyšetrenie tkanivových extraktov, výkalov, tekutiny z vezikúl a sekrétov z nosohltanu. Elektrónová mikroskopia sa široko používa na štúdium morfogenézy vírusu, jeho schopnosti sa rozširujú použitím značených protilátok.

Metóda molekulárnej hybridizácie, založená na detekcii vírusovo špecifických nukleových kyselín, umožňuje detekovať jednotlivé kópie génov a nemá rovnakú citlivosť. Reakcia je založená na hybridizácii komplementárnych reťazcov DNA alebo RNA (sond) a tvorbe dvojvláknových štruktúr. Najlacnejšou sondou je klonovaná rekombinantná DNA. Sonda je označená rádioaktívnymi prekurzormi (zvyčajne rádioaktívnym fosforom). Sľubné je použitie kolorimetrických reakcií. Existuje niekoľko možností molekulárnej hybridizácie: bodová hybridizácia, blotová hybridizácia, sendvičová hybridizácia, in situ hybridizácia atď.

Sérologické metódy vo virológii sú založené na klasických imunologických reakciách : reakcie fixácie komplementu, inhibícia hemaglutinácie, biologická neutralizácia, imunodifúzia, nepriama hemaglutinácia, radiálna hemolýza, imunofluorescencia, enzýmová imunoanalýza, rádioimunoanalýza. Boli vyvinuté mikrometódy pre mnohé reakcie a ich techniky sa neustále zdokonaľujú. Tieto metódy sa používajú na identifikáciu vírusov pomocou súboru známych sér a na sérodiagnostiku na stanovenie nárastu protilátok v druhom sére v porovnaní s prvým (prvé sérum sa odoberá v prvých dňoch po ochorení, druhé - po 2-). 3 týždne). Diagnostická hodnota nie je menšia ako štvornásobné zvýšenie protilátok v druhom sére. Ak detekcia protilátok triedy IgM naznačuje nedávnu infekciu, potom protilátky triedy IgC pretrvávajú niekoľko rokov a niekedy aj celý život. Protilátky triedy IgM sa objavia skôr ako protilátky triedy G (na 3. – 5. deň choroby) a po niekoľkých týždňoch miznú, takže ich detekcia naznačuje nedávnu infekciu. Protilátky triedy lgM sa detegujú imunofluorescenciou alebo enzýmovým imunotestom s použitím anti-m antisér (séra proti ťažkým reťazcom lgM).